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國標GB/T18932.1-2002蜂蜜中碳-4植物糖含量測定方法

點擊: 次 時間:2016-12-27 14:17

1、范圍

GB/T18932的本部分規(guī)定了蜂蜜中碳-4植物糖含量的穩(wěn)定碳同位素比率測定方法。本部分適用于各種蜂蜜中碳-4植物(玉米或甘蔗)糖含量的測定。

2、規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過GB/T18932的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本部分,然而,鼓勵根據(jù)本部分達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本部分。

GB/T6682-1992分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法(neqISO3696:1987)

3、原理

試樣在具有純氧脈沖及催化劑存在的在線式全自動Dumas燃燒管中燃燒,經(jīng)化學純化及氣相色譜儀GC分離后用穩(wěn)定碳同位素質(zhì)譜儀測定其δ13C值。以蜂蜜蛋白質(zhì)δ13C值為標準,蜂蜜δ13C值與其進行比較,根據(jù)其差值來計算蜂蜜中碳-4植物糖的含量。

4、試劑及材料

除非另有說明,所用試劑均為分析純,水為GB/T6682-1992規(guī)定的一級水。

橄欖油標準:%C=57.00,δ13C PDB=一29.07%。

鎢酸鈉(Na2WO4·2H20 )

硫酸:優(yōu)級純

0.10mm-0.14mm孔徑尼龍濾布。

10uL移液器。

8mmX5mm錫杯。

10%鎢酸鈉溶液:稱取10g鎢酸鈉,用水定容至100ML。

0.335mol/L硫酸溶液:移取9.4ml,硫酸,用水定容至500mL

5、儀器

5.1 INTEGRA-CN在線式全自動穩(wěn)定同位素質(zhì)譜儀或相同性能的同位素質(zhì)譜儀,δ13C測定精度0.1%。

載氣:氦氣,純度99.999%;助燃氣:氧氣,純度99.999% .

5.2 離心機:相對離心力(RCF) :1500Xg

5.3 水浴鍋,十分之一電子天平,移液器,烘箱

試樣制備與保存

6.1 試樣制備

對無結(jié)晶的實驗室樣品,將其攪拌均勻。對有結(jié)晶的樣品,在密閉情況下,置于不超過60℃的水浴中溫熱,振蕩,待樣品全部融化后攪勻,迅速冷卻至室溫。分出0.5kg作為試樣。制備好的試樣置于樣品瓶中,密封,并標明標記。

6.2 試樣保存

將試樣于常溫下保存。

分析步驟

7.1 試料的制備

7.1.1 蜂蜜樣品

蜂蜜樣品經(jīng)0.10mm-0.14mm孔徑尼龍濾布過濾,除去蜂蜜中固體雜質(zhì)后,用移液器移取3mL至8mmX5mm錫杯中,密封備用。每個樣品制備2個

7.1.2 蜂蜜蛋自質(zhì)樣品

稱取10g~ 12g潔凈的蜂蜜樣品于50mL離心管中,加人4mL水混勻。在一支20ml,量筒中加入2.0mL10%鎢酸鈉溶液和2.0mL0.335mol/L硫酸溶液,迅速混勻后,加到上述盛蜂蜜樣品的離心管中,混勻。置于80℃水浴中加熱不少于30min,在加熱過程中每間隔5min-10min旋轉(zhuǎn)混合離心管中內(nèi)容物20s,直到有絮狀物析出。以水注滿離心管并混合后, 在RCF為1500Xg下離心5min,傾掉上層清液, 再以約50ml水充分洗滌沉淀物并離心,如此反復洗滌沉淀物5次,最后倒干上清液,將含有沉淀蛋白質(zhì)的離心管置于750℃烘箱中干燥3h以上。然后,稱取上述烘干的蛋白質(zhì)3.0mg,于8mmX5mm錫杯中,密封備用,每個樣品制備2個。

7.1.3 標準物及控制樣品

移取2mL橄欖油標準于8mm X 5mm錫杯中,密封備用,此標物作為蜂蜜樣品檢驗批的標準和控制樣品移取1m1橄欖油標準于8mm X 5mm錫杯中,密封備用,此標物作為蜂蜜蛋白質(zhì)樣品檢驗批的標準和控制樣品。

7.2 測定

7.2.1 位素質(zhì)譜儀的預調(diào)

確認I N TEG RA- CN 同位素質(zhì)譜儀的工作環(huán)境、 氣密性、離子室的真空度均符合要求, 然后檢驗INTEGRA - CN的穩(wěn)定性和峰 形, 必 要時調(diào)整離子源參數(shù)值。確認數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)設置正確,必要時進行調(diào)整

7.2.2 檢驗批的設置

在碳同位素測定條件下,選定兩點標準漂移校正模式, 設定標準名稱, 輸人標準參數(shù), 根據(jù)待測樣品的多少設定檢驗批。

7.2.3 試料測定

按照已設定檢驗批的順序,在自動進樣器上擺放好待測試料, 在計算機控制下, 運行檢驗批進行測定。測定完畢后, 試 料的δ13C 值由計算機自 動計算給出。同一樣品的蜂蜜δ13C 值和其蛋白質(zhì)δ13C值應在相同的儀器條件下測定。

8、結(jié)果計算

蜂蜜中碳一4植物糖的含量按式(1)計算:

式中:

X — 蜂蜜中碳-4 植物糖的百分含量;

δ13CP—蜂蜜中蛋白質(zhì)δ13C值;

δ13C H—蜂蜜δ13C值;

- 9.7— 玉米糖漿的平均δ13C值。

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