分光光度計主要由光源、單色光器、吸收池、測光機(jī)構(gòu)以及記錄器組成，其工作原理是：一束單色光通過有色溶液時，部分光線被吸收，末被吸收的部分投射到光電管上，光電管將光能轉(zhuǎn)變?yōu)殡娔?，結(jié)果就出現(xiàn)光電流，光電流的強(qiáng)弱與溶液的吸光量強(qiáng)弱有關(guān)。

即若溶液的厚度不變，則溶液的濃度愈大，吸光度就愈大;反之，溶液的濃度愈小，吸光度就愈小。

一、使用方法

1、預(yù)熱儀器。為使測定穩(wěn)定，將電源開關(guān)打開，使儀器預(yù)熱20min，為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照。預(yù)熱儀器時和在不測定時應(yīng)將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷。

2、選定波長。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，轉(zhuǎn)動波長調(diào)節(jié)器，使指針指示所需要的單色光波長。

3、固定靈敏度檔。根據(jù)有色溶液對光的吸收情況，為使吸光度讀數(shù)為0.2-07，選擇合適的靈敏度。為此，旋動靈敏度檔，使其固定于某一檔，在實(shí)驗(yàn)過程中不再變動。一般測量固定在“1”檔。

4、調(diào)節(jié)“0”點(diǎn)。輕輕旋動調(diào)“0”電位器，使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時，比色皿暗箱蓋是打開的，光路被切斷，光電管不受光照)。

5、調(diào)節(jié)T=100%。將盛蒸餾水(或空白溶液或純?nèi)軇?的比色皿放入比色皿座架中的第一格內(nèi)，有色溶液放在其它格內(nèi)，把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上，轉(zhuǎn)動光量調(diào)節(jié)器，使透光度T=100%，即表頭指針恰好指在T=100%處。

6、測定。輕輕拉動比色皿座架拉桿，使有色溶液進(jìn)入光路，此時表頭指針?biāo)緸樵撚猩芤旱奈舛華。讀數(shù)后，打開比色皿暗箱蓋。

7、關(guān)機(jī)。實(shí)驗(yàn)完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。

二、使用的注意事項(xiàng)

1、比色杯應(yīng)與分光光度計相配對，禁止隨意挪用。

2、比色杯應(yīng)持其側(cè)壁的毛玻璃面。

3、盛液時不能太滿，外壁如有液體，只能用濾紙沾去水份，再用擦鏡紙擦干凈。

4、測畢，比色液一般應(yīng)倒回原試管中，直至計算無誤后方可倒掉。