1 實驗原理

通過高效液相色譜測試已知麻度花椒的峰面積，利用單點法測試供試品的峰面積后計算出供試品麻度（雜峰較少所以有一定的可行性）。

如用戶購買了花椒對照品，可測多個濃度點繪制標準曲線，結果最準確。

2 儀器藥品

LC220高效液相色譜儀，C18反向柱，水浴鍋，超聲波清洗儀，針頭過濾器（包括有機相針頭濾膜），砂芯漏斗（包括濾膜、真空泵，用于抽濾流動相），移液管或移液槍，具塞三角瓶等玻璃儀器。純水，色譜級甲醇。

3 色譜條件

色譜柱：C18色譜柱；  流動相：水—甲醇；

進樣量：20 μL；       流速：0.8 mL/min；     檢測波長：254 nm。

梯度洗脫條件：

4 實驗步驟

4.1 方法一，與已知濃度樣品做對照

    4.1.1 樣品處理

準確吸取0.5 mL成品花椒油，置于具塞三角瓶中，用分析純甲醇稀釋到150 mL，于40 ℃—50 ℃水浴中，期間每10—15 min搖晃幾次使甲醇充分浸提出待測成分，持續(xù)1 h，然后拿出靜止2—3 h待溶液清澈即可或用離心機離心5 min加快分層去除乳化，處理結束用針頭過濾器過濾待測。

已知其中樣品1麻度，測得樣品1峰面積及樣品2峰面積可得樣品2麻度，如下式所示：

式中：m—麻度，S—峰面積。

4.2 方法二，要求有花椒對照品（推薦，參照重慶地標DB50/T 321-2009）

    4.2.1 對照品配置

花椒麻味物質對照品貯備液（100 μg/mL的甲醇溶液）：準確稱取100 mg花椒麻味物質對照品，在容量瓶中用甲醇定容至1000mL。-10 ℃以下，可保存2年。

花椒麻味物質對照品使用液：分別吸取花椒麻味物質對照品貯備液1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL，用甲醇溶解并定容至 10 mL，配制成分別相當于10 μg/mL、20 μg/mL、30 μg/mL、40 μg/mL、50 μg/mL濃度的花椒麻味物質對照品使用溶液。

    4.2.2 供試品制備

準確稱取樣品0.5 g—1 g（精確到0.01 g），置于具塞三角瓶中，用150 mL 的分析純甲醇于40 ℃—50 ℃水浴中振蕩浸提30 min后，再將其轉移到分液漏斗中，振搖2 min，靜置分層后，收集甲醇萃取液。甲醇不溶部分再用少量甲醇萃取2次—3次，合并甲醇萃取液，定容至500 mL，并用0.45 μm孔徑濾膜過濾，濾液待測。

4.2.3 數(shù)據(jù)處理

樣品中花椒麻味物質的含量（x）以毫克每克（mg/g）表示，按下式計算：

式中：

x—待測液中花椒麻味物質的含量（mg/g）；

c—在工作曲線上查出或回歸方程求出的花椒麻味物質的含量（μg/mL）；

m—樣品的質量（g）；

V—待測液的定容體積（mL）；

5 譜圖及計算