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液相色譜儀流動相的配制與使用介紹

點擊: 次 時間:2017-06-26 11:09

液相色譜儀是藥物分析工作者最常使用的儀器之一,本文主要說明液相色譜流動相的配制與使用。

1、恒度洗脫

將水相與有機(jī)相混合后、使用混合型過濾膜抽濾,用一個管路(如A管)泵入儀器,這是基本原則。若使用兩個管路(一個純水相、一個純有機(jī)相)泵入儀器,極易造成水相中鹽和表面活性劑的少量析出。

剩余的流動相可繼續(xù)使用,需密封后放置于陰涼處,待下次實驗時與新配制的流動相混合后使用。無需擔(dān)心發(fā)霉、無機(jī)鹽析出、揮發(fā)、比例不準(zhǔn)等問題。

2、梯度洗脫

流動相最為科學(xué)的配制方式如下:

(1)A相為高比例水相-低比例有機(jī)相,B相為低比例水相-高比例有機(jī)相(英國藥典如此規(guī)定);

(2)A相為高比例水相-低比例有機(jī)相,B相為純有機(jī)相。

最不科學(xué)的為:A相為純水相、B相為純有機(jī)相,這會導(dǎo)致基線漂移嚴(yán)重,難以進(jìn)行穩(wěn)定的雜質(zhì)檢測。

梯度洗脫結(jié)束后,建議經(jīng)5min后回到初始狀態(tài),再穩(wěn)定5min后開始下一測定。這10min的穩(wěn)定極為關(guān)鍵,切勿短時間內(nèi)回到初始狀態(tài),會對儀器和色譜柱造成損害。一周內(nèi),對梯度洗脫進(jìn)行連續(xù)試驗,結(jié)果是:第一針與最后一針主成分保留時間相差均小于6s。

引申閱讀:水相中溶質(zhì)的溶解

水相中需溶解的無機(jī)鹽和表面活性劑等固體溶質(zhì),建議采用加熱法,不建議采用振搖、超聲等方式。因為振搖、超聲有可能使得溶質(zhì)處于“臨界膠團(tuán)濃度”,其后一旦遇到某特殊情形(如遇有機(jī)溶劑、溫度劇降等),極易析出結(jié)晶,損傷儀器和色譜柱,呈現(xiàn)泵頭處析出“鹽和白粉”的現(xiàn)象。

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