1、無菌操作室滅菌

培養(yǎng)材料進(jìn)行培養(yǎng)、觀察或更換培養(yǎng)液時，必須從各方面防止任何污染物進(jìn)入培養(yǎng)液或容器，所以無菌操作室的滅菌是至關(guān)重要的。

由于無菌操作室的污染來源主要是空氣中的細(xì)菌和真菌孢子，因此長期停用后的無菌操作室應(yīng)進(jìn)行熏蒸滅菌，熏蒸是用高錳酸鉀+甲醛[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]進(jìn)行無菌室的滅菌。

經(jīng)常使用的無菌操作室，在每次使用前都應(yīng)進(jìn)行地面衛(wèi)生清潔，并用紫外線燈照射30min，進(jìn)行空氣滅菌。

對超凈工作臺，每次操作前用紫外燈照射30min，然后用70%～75%酒精擦拭。

2、培養(yǎng)液滅菌

培養(yǎng)液在制備過程中帶有各種雜菌，分裝后應(yīng)立即滅菌，或在24小時內(nèi)完成滅菌工序。

目前常用過濾除菌法除去培養(yǎng)物操作液和培養(yǎng)液中的細(xì)菌，或?qū)ε囵B(yǎng)液中耐熱組分先進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，然后在無菌室加入經(jīng)過過濾除菌的不耐熱溶液，混勻后分裝備用。液體培養(yǎng)液在冷卻到室溫后再加入過濾除菌溶液。過濾除菌時，使用孔徑為0.22～0.45μm或更小的細(xì)菌濾膜。過濾除菌可利用抽濾裝置或注射過濾器進(jìn)行，所用器皿均應(yīng)進(jìn)行高壓消毒滅菌，溫度不應(yīng)超過121℃。

使用高壓蒸汽滅菌器滅菌時，將分裝好的培養(yǎng)液放入底部有一定量(淹沒加熱管)涼水的高壓蒸汽滅菌器內(nèi)，增壓至0.35~0.4 kg/cm2時排凈滅菌器內(nèi)冷空氣，以便使蒸汽能到達(dá)各個消毒部位，保證消毒滅菌徹底。然后繼續(xù)加壓加熱，當(dāng)壓力表讀數(shù)達(dá)到1.0~1.1 kg/cm2為121℃，保持15~20min即可。由于消毒滅菌效果取決于溫度而不是壓力，所以在一定壓力下保持較長的消毒滅菌時間是必須的。在121℃的蒸汽溫度下可以很快殺死各種細(xì)菌及高度耐熱的芽孢桿菌，因此許多培養(yǎng)液的消毒滅菌壓力、溫度一般保持在1.0～1.1 kg/cm2、121℃。消毒滅菌時間與需要消毒滅菌的培養(yǎng)液量密切相關(guān)，時間不足達(dá)不到滅菌效果，時間過長培養(yǎng)液內(nèi)的一些化學(xué)物質(zhì)遭到破壞，影響培養(yǎng)液成分。消毒滅菌結(jié)束后，關(guān)閉熱源，只有當(dāng)滅菌器內(nèi)壓力降為零時才能打開放氣閥，排除剩余蒸汽，取出培養(yǎng)液。不可在壓力較高時打開放氣閥，引起減壓沸騰，使容器中液體溢出。

3、玻璃器皿、塑料器皿和器械滅菌

玻璃器皿可進(jìn)行干熱滅菌或高壓蒸汽滅菌，但在蒸汽滅菌后最好及時烘干水分。

對不能進(jìn)行高壓蒸汽滅菌的塑料器皿可用75%酒精浸泡，使用前在無菌操作臺面上晾干的同時，用紫外線重復(fù)殺菌。實驗室還可以用環(huán)氧乙烷滅菌袋對塑料器皿進(jìn)行消毒，消毒后的器皿要充分散氣2～4小時后才可使用。

無菌操作所用的各種器械，一般采用干熱或高壓蒸汽滅菌，或用75%酒精浸泡，然后在無菌操作臺面上晾干的同時再用紫外線重復(fù)殺菌;在使用期間可多次對其進(jìn)行酒精燈火焰灼燒滅菌。

4、培養(yǎng)材料的消毒滅菌

采自動物機體的實驗材料，攜帶著微生物及雜質(zhì)，接種前須進(jìn)行表面消毒滅菌，對內(nèi)部已受微生物侵染的材料應(yīng)予以淘汰。從動物機體采集的某些組織塊，須用消毒劑進(jìn)行浸泡處理，進(jìn)行表面消毒。常用消毒劑有過氧化氫(10~12%，浸泡5~15 min)、過氧乙酸(0.05%，浸泡30s~1min)、酒精(70~75%，浸泡2 min)。

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