對(duì)于分光光度計(jì)而言，90%的故障均為光路原因，所以當(dāng)儀器使用者遇到儀器有故障或者平常維護(hù)保養(yǎng)時(shí)，首先要做到四個(gè)自查步驟。這四個(gè)步驟分別是：波長(zhǎng)準(zhǔn)確度、基線平直度、基線噪聲和光源能量。

1、波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的檢查和確認(rèn)

關(guān)于儀器波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的確認(rèn)一般有兩種方式：一種是儀器自帶的確認(rèn)功能；另一種是使用標(biāo)準(zhǔn)器具——鈥玻璃來確認(rèn)。

所謂使用儀器自帶的功能實(shí)際上就是利用氘燈本身的486.0nm或656.1nm的特征譜線來確認(rèn)。這種自檢也有兩種方式：一種是通過儀器在初始化完成后的顯示數(shù)值結(jié)果來確認(rèn)；另一種是通過掃描的氘燈圖譜來確認(rèn)。分別見下圖-1，圖-2所示：

使用儀器自帶的波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的檢查功能雖然簡(jiǎn)單易行，但是有一定的局限性，那就是只能檢查486 nm和656.1nm兩個(gè)波長(zhǎng)位置的精度，而不能反映出整個(gè)波長(zhǎng)范圍的波長(zhǎng)精度。

目前的分光光度計(jì)的使用波長(zhǎng)范圍大概都在190～1100nm區(qū)域，由于儀器的波長(zhǎng)正弦結(jié)構(gòu)的三點(diǎn)（即短波-中波-長(zhǎng)波）統(tǒng)調(diào)的機(jī)械誤差，可能在整個(gè)區(qū)域的某一區(qū)間內(nèi)的波長(zhǎng)誤差很大；此時(shí)，就需要使用專用的鈥玻璃來確認(rèn)了。使用鈥玻璃確認(rèn)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的測(cè)試特征圖譜見圖-3所示：

圖-3鈥玻璃的特征譜線（紅框里數(shù)據(jù)為常用參考波長(zhǎng)值）

2、基線平直度的檢查和確認(rèn)

基線平直度（或稱平坦度）是確保測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確與否的重要指標(biāo)。

眾所周知，短跑運(yùn)動(dòng)員在比賽時(shí)要站在同一起跑線上，目的是為了到達(dá)終點(diǎn)后客觀公正地比較各位運(yùn)動(dòng)員的用時(shí)多少，用以評(píng)估成績(jī)。形象地講，基線就類似這條起跑線。但是，據(jù)我所知，許多儀器操作者往往忽略基線平直度的檢查甚至不清楚基線平直度的重要性，結(jié)果造成檢測(cè)的誤差。

關(guān)于基線平直度的指標(biāo)，各個(gè)廠家的技術(shù)指標(biāo)有所不同，例如圖-4例舉的基線平直度的要求是小于±0.001Abs

圖-4正常的基線平直度

  下圖是異常的基線平直度例子：

圖-5異常的基線平直度（未做基線校正的結(jié)果）

3、基線噪聲的檢查和確認(rèn)

一般儀器說明書上給出的基線噪聲指標(biāo)是狹義的概念，具體方法就是在某一個(gè)波長(zhǎng)下（一般是500nm），做一個(gè)時(shí)間掃描，看看所測(cè)得的噪聲的最大峰-峰值的范圍是多大。例如圖-6所示：

圖-6儀器基線噪聲檢測(cè)方法

但是我這里指的基線噪聲是廣義的噪聲檢查。尤其是儀器采用波長(zhǎng)掃描的工作方式，更要做一個(gè)大波長(zhǎng)范圍的基線噪聲檢查，這個(gè)檢查的重要性不言而喻。通過這個(gè)廣義的檢查可以發(fā)現(xiàn)儀器的當(dāng)前的狀態(tài)正常以否。例如異?；€噪聲的例子如下圖所示：

圖-7異常的基線噪聲（200～600nm）

4、光源能量的檢查和確認(rèn)

關(guān)于前三項(xiàng)檢查的內(nèi)容我相信許多儀器的操作者都做過或者認(rèn)可；但是對(duì)于光源能量的確認(rèn)的重要性，可能大多數(shù)人并不知曉。

我們知道，影響分光光度計(jì)測(cè)試重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性的一個(gè)重要指標(biāo)就是信噪比(S/N),但是影響信噪比的一個(gè)關(guān)鍵因素就是光源強(qiáng)度的大小；而影響光源強(qiáng)度的因素又有：光源燈、光源鏡、濾光片、透鏡、反光鏡、狹縫、石英窗、檢測(cè)器等等。所以說光源能量的檢查和確認(rèn)可以從一個(gè)側(cè)面反映出儀器的當(dāng)前狀態(tài)，因此是一個(gè)重要的必不可少的重要環(huán)節(jié)。下面就是氘燈和鎢燈的能量檢測(cè)記錄圖譜：

圖-8氘燈能量圖譜

 圖-9鎢燈能量圖譜

關(guān)于光源能量圖譜檢查的說明：

① 由于各個(gè)廠家儀器設(shè)計(jì)的不同，其光源能譜的強(qiáng)度值也是不同的，所以相互之間沒有可比性，只有儀器本身的前后自我比對(duì)。

② 儀器在做光源能量定期檢查時(shí)，儀器的各項(xiàng)參數(shù)的設(shè)置始終要一致，否則得到的記錄圖譜失去了可比性。

③ 從道理上講，這個(gè)檢查應(yīng)該在儀器初期啟用時(shí)就應(yīng)該做首次記錄，其目的是為了今后以此記錄作為原始參考資料。但是遺憾的是，大部分儀器使用者并不知道這個(gè)檢查的必要性和重要性。如果以前沒有做過這項(xiàng)檢查，那么現(xiàn)在趕緊補(bǔ)救還是有一定的參考價(jià)值。

注：上述四項(xiàng)自檢過程在一些沒有掃描功能的低檔儀器中是較難完整實(shí)現(xiàn)的。

（內(nèi)容來源儀器信息網(wǎng)）