微生物檢驗(yàn)中，無菌操作是重中之重。具體注意事項(xiàng)如下：

一、關(guān)于采用酒精棉球消毒的注意事項(xiàng)

1.用酒精棉球擦拭雙手，包括手掌、手背，尤其是手指，更換一個(gè)酒精棉球擦拭酒精燈附近（約10cm）桌面。

2.點(diǎn)燃酒精燈，在酒精燈附近拆器皿包裝，并對(duì)器皿做相應(yīng)標(biāo)記。

3.用酒精棉球再次擦拭雙手，開始實(shí)驗(yàn)操作。

4.消毒用酒精棉球濕度以不擠壓出酒精為宜。

二、關(guān)于酒精燈正確使用的注意事項(xiàng)

1.酒精量以大于1/3，小于2/3為正確量。

2.防風(fēng)罩應(yīng)小口朝上放置于酒精燈上，反過來放置會(huì)導(dǎo)致氧氣沒有充分燃燒。

3.使用酒精燈前要檢查燈芯帽是否蓋得太緊，以防酒精不能上升，影響酒精燈燃燒。點(diǎn)燃酒精燈時(shí)嚴(yán)禁兩個(gè)酒精燈對(duì)點(diǎn)。

4.熄滅酒精燈方法：先用燈芯帽扣壓并熄滅火焰，再揭帽重新扣壓一次。這樣可防止蒸汽倒吸燈帽，再次使用酒精燈時(shí)難以揭開燈帽。

5.做樣品稀釋及從試管取樣實(shí)驗(yàn)時(shí)，酒精燈應(yīng)放在操作人員和試管架之間，便于無菌操作。

三、關(guān)于吸量管使用的注意事項(xiàng)

1.左手拿洗耳球，右手持吸量管，用右手食指平按住吸量管的頂部。

2.吸取樣品后進(jìn)行定量時(shí)，吸量管吸液口應(yīng)貼附于試管內(nèi)壁；放樣時(shí)，吸量管吸液口也應(yīng)貼附于試管約1/2內(nèi)壁，不應(yīng)貼附在管口處放液。吸量管應(yīng)盡可能垂直放液。

3.用吸量管往空平皿加入1mL溶液時(shí)，吸量管應(yīng)貼附于平皿底部中央位置放液；用吸量管在平板上加入0.1mL溶液做涂布接種時(shí)，吸量管應(yīng)垂直、懸空放液于平板中央。

4.因吸量管拆封包裝后應(yīng)馬上使用，故無須對(duì)吸量管吸液口過火焰消毒。

5.整個(gè)取樣放樣的過程應(yīng)盡可能保證試管口或錐瓶口靠近酒精燈火焰附近。

四、關(guān)于樣品梯度稀釋的注意事項(xiàng)

1.從試管架上取出所需試管于酒精燈火焰附近拔出試管塞，并在火焰外焰處對(duì)試管口過火焰進(jìn)行消毒。

2.將試管放回試管架后用吸量管進(jìn)行取樣，然后取出該試管于火焰附近調(diào)節(jié)吸量管內(nèi)溶液體積。

3.取樣完成后對(duì)試管口再次消毒并塞上試管塞，將試管放回試管架原處。

4.從試管架上取出所需加樣的試管于火焰附近進(jìn)行加樣放液操作。

五、關(guān)于培養(yǎng)皿記號(hào)的注意事項(xiàng)

1.標(biāo)記統(tǒng)一寫在平皿底部邊緣，以“字?jǐn)?shù)少、字體小、清晰、明確”為原則。

2.標(biāo)記內(nèi)容包括：班級(jí)、學(xué)號(hào)、日期、培養(yǎng)基名稱、稀釋級(jí)。

六、關(guān)于平板制備的注意事項(xiàng)

1.打開培養(yǎng)皿的方法：左手小指、無名指、中指及一部分掌腹托住平皿底部，食指和拇指張開輕握皿蓋側(cè)部，以食指為支點(diǎn)，擺動(dòng)拇指打開皿蓋。打開的皿口應(yīng)向著酒精燈的外焰。切勿把開口朝向操作人員。

2.手持錐形瓶中下部將瓶中培養(yǎng)基傾倒入平皿中央位置，錐瓶口不應(yīng)接觸平皿。

培養(yǎng)基應(yīng)一次注入夠量，不應(yīng)分次加入（除實(shí)驗(yàn)特殊規(guī)定）。

3.混勻培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)將裝有混合培養(yǎng)基的平皿于手中順時(shí)針輕微搖勻2～3次，平放于桌面上后再次順時(shí)針搖勻2～3次，整個(gè)過程應(yīng)在培養(yǎng)基尚未開始凝固時(shí)完成。學(xué)生只要有其中一個(gè)搖勻動(dòng)作也算完成混勻培養(yǎng)基。

4.手中裝有培養(yǎng)基的平皿應(yīng)水平放置于臺(tái)面上，不應(yīng)從臺(tái)面邊緣往里推。在位置允許的情況下，應(yīng)分開平攤放置待凝。

七、關(guān)于涂布方式的注意事項(xiàng)

1.L型涂布棒應(yīng)放平涂布。

2.涂布時(shí)應(yīng)從中間按同一個(gè)方向打圈方式往周邊涂布，可以重復(fù)涂布。

3.從高稀釋級(jí)往低稀釋級(jí)涂布時(shí)，可以不用更換涂布棒，也不用灼燒涂布棒。涂布同一個(gè)稀釋級(jí)的不同平板時(shí)也不用灼燒涂布棒。但是從低稀釋級(jí)往高稀釋級(jí)涂布時(shí)，如不更換涂布棒，一定要灼燒涂布棒（原則上不采用這個(gè)涂布順序）。

八、關(guān)于培養(yǎng)基接種的注意事項(xiàng)

1.液體培養(yǎng)基接種時(shí)不強(qiáng)調(diào)接種環(huán)是否應(yīng)接觸到液體培養(yǎng)基。

2.單手持兩支大試管切忌手部覆蓋培養(yǎng)基面，空白管在里面（近操作人員），菌種在外面。

九、關(guān)于接種環(huán)滅菌的注意事項(xiàng)

取完固體菌時(shí)，應(yīng)先垂直灼燒環(huán)部再往上灼燒其余接種絲；取完液體菌時(shí)，應(yīng)先灼燒非環(huán)處的其它接種絲，再灼燒環(huán)部，這樣可避免環(huán)上液體突然遇熱而爆破濺出，造成污染。

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